生化分析儀采用一個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測(cè)組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無重疊時(shí)，可以選用。

　　在吸光度檢測(cè)中，使用一個(gè)主波長(zhǎng)和一個(gè)次波長(zhǎng)的稱雙波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí)，采用雙波長(zhǎng)方式更好。

　　雙波長(zhǎng)的作用：雙波長(zhǎng)(di-wavelength)測(cè)定優(yōu)點(diǎn)是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源，到比色杯、單色器、檢測(cè)器的整個(gè)光路系統(tǒng)中，均存在著隨時(shí)間發(fā)生變化的不穩(wěn)定的檢測(cè)信號(hào)，即噪音，而雙波長(zhǎng)檢測(cè)是同時(shí)進(jìn)行的，兩種波長(zhǎng)檢測(cè)產(chǎn)生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干擾。當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí)，會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收，而干擾測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用雙波長(zhǎng)方式測(cè)定可以部分消除這類干擾，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

　　次波長(zhǎng)的確定方法：當(dāng)被測(cè)物的主波長(zhǎng)確定之后，再選擇次波長(zhǎng)。如根據(jù)甘油三酯等干擾物吸收光譜特征，選擇次波長(zhǎng)，使干擾物在主、次波長(zhǎng)處有盡可能相同的光吸收值，而被測(cè)物在主、次波長(zhǎng)處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來說，次波長(zhǎng)應(yīng)大于主波長(zhǎng)100nm。以主波長(zhǎng)與次波長(zhǎng)吸光度差來計(jì)算結(jié)果。

　　雙波長(zhǎng)的具體應(yīng)用：對(duì)于某些反應(yīng)速度快且無法設(shè)置為兩點(diǎn)終點(diǎn)法的分析項(xiàng)目，尤其是單試劑分析中，可以利用雙波長(zhǎng)的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測(cè)定的項(xiàng)目應(yīng)用雙波長(zhǎng)的為血清總蛋白（雙縮脲法）主波長(zhǎng)500nm，次波長(zhǎng)576nm；血清白蛋白（溴甲酚氯法）主、次波長(zhǎng)分別為600和700nm；鈣（偶氮砷Ⅲ法）主、次波長(zhǎng)分別為660、770nm；磷（紫外比色法）主、次波長(zhǎng)為340、405nm，鎂（二甲苯胺藍(lán)法）主、次波長(zhǎng)為505和600nm。